Агар Байрд-Паркера (М043)

Основа агару Бэйд-Паркера після внесення спеціальних добавок рекомендується для виділення і підрахунку коагулазопозитивних стафілококів у харчових продуктах та іншому досліджуваному матеріалі.

 

 

Baird Parker Agar Base (M043)
Ріст Staphylococcus aureus

 

 

Склад**:

Інгредієнти	M043 грам/літр	M1140 грам/літр
Гідролізат казеїну	10,00	10,00
М'ясний екстракт	5,00	5,00
Дріжджовий екстракт	1,00	1,00
Гліцин	12,00	12,00
Натрію піруват	10,00	10,00
Літію хлорид	5,00	5,00
Сульфаметазин	–	0,05
Агар-агар	20,00	20,00
Кінцеве значення ph (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Склад вивірений і доведений до відповідності необхідним параметрам

Приготування:

Розмішати 63,0 г порошку 950 мл дистильованої води. Прокип'ятити для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121°С) протягом 15 хв. Охолодити до 50°С, асептично додати 50 мл концентрованої суспензії яєчного жовтка (FD045) та 3 мл стерильного 3,5%-ного розчину теллурита калію (FD047) або 50 мл желточно-теллуритовой емульсії (FD046). Ретельно перемішати і розлити в чашки Петрі.

ОБЕРЕЖНО: хлорид літію отруйний. Уникати контакту з ним і вдихання парів. У разі потрапляння хлориду літію на шкіру негайно промити великою кількістю води.

Принцип і оцінка результату:

Середа розроблена Baird-Parker (1, 2) як модифікація телур-глициновой середовища Zebovitz і співавт. (3) для виділення Staphylococcus aureus з харчових продуктів. Піруват натрію, захищаючи пошкоджені мікробні клітини, допомагає виділенню культури. Хлорид літію і телур калію пригнічують ріст більшості супутніх мікроорганізмів, крім Staphylococcus aureus. Гліцин і піруват натрію стимулюють ріст стафілококів. Після додавання жовтка середовище стає жовтою і непрозорою. За рахунок бактеріальних протеаз навколо відповідних колоній на середовищі з жовтком формуються прозорі зони. Діагностичною ознакою коагулазопозитивних стафілококів на цьому середовищі є прозора зона навколо сіро-чорних колоній. У міру подальшого інкубування навколо колоній формується непрозора зона, що може бути пов'язано з ліполітичну активність мікроорганізмів. У порівнянні з іншими середовищами, агар Бэйд-Паркера при тій же селективності менше пригнічує ріст Staphylococcus aureus (4, 5, 6). У зв'язку з цим дана середовище офіційно визнана і рекомендується компетентними організаціями, зокрема, для виділення і підрахунку стафілококів (7, 8). Разом з тим, остаточна ідентифікація Staphylococcus aureus, виділених на цій середовищі, повинна проводитися з урахуванням додаткового тесту на плазмакоагулазу. Показано (9), що додавання в середовище 50 мг/мл сульфаметазина пригнічує ріст і роїння протеев. Основу агару Бэйд-Паркера (М043) можна також використовувати для визначення коагулазной активності, якщо замість суспензії жовтка в середу додати суміш плазми і фібриногену. Для этого 375 мл бычьего фибриногена, 2,5 мл кроличьей плазмы, 2,5 мг ингибитора трипсина и 2,5 мг теллурита калия растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавляют к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдержанной при 45-50°С (10). Тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Коагулазоположительные стафилококки на этой среде через 24-40 ч при 35°С образуют белые или серо-черные колонии, окруженные зоной помутнения. Ввиду отсутствия эмульсии желтка необходимо восстановление теллурита, что ведет к образованию стафилококками белых или серых колоний. Для кількісної оцінки вибирають чашки, де виросло 20-200 колоній. Підраховують колонії, схожі на колонії Staphylococcus aureus, і перевіряють їх на коагулазную активність. Колонії деяких супутніх мікроорганізмів можуть сприяти знищенню («роз'їдання») коагулазного віночка. У разі негативного результату проводять додаткові підтверджуючі тести. Результат виражають кількістю Staphylococcus aureus в 1 г харчового продукту.

Контроль якості:

Зовнішній вигляд порошку:

Гомогенний сипучий жовтий порошок.

Щільність готової середовища:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Первоначально среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, а после добавления желточно-теллуритовой эмульсии (FD046) становится желтой и непрозрачной, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (6,3% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний	Лецитиназа
Proteus mirabilis (25933)*	Хороший или обильный	Коричнево-черные	—
Staphylococcus aureus (25923)	Хороший или обильный	Серо-черные блестящие	+
Staphylococcus epidermidis (12228)	Слабый или хороший	Черные	—
Micrococcus luteus (10240)	Слабый или хороший	Очень мелкие коричнево-черные	—
Bacillus subtilis (6633)	Слабый или отсутствует	Темно-коричневые матовые	—
Escherichia coli (25922)	Слабый или отсутствует	Большие коричнево-черные	—

Примечание: * на среде М1140 протеи обычно не растут или дают слабый рост без роения