Середа Олькеницкого (Залізо-глюкозо-лактозный агар з сечовиною) М021

Середа Олькеницкого ― призначена для диференціації ентеробактерій по здатність зброджувати вуглеводи в присутності індикатора і железосульфатного комплексу.

Приготування:

Розмішати 65,0 г порошку в 1000 мл дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Ретельно перемішати і розлити у пробірки для тестування. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121°С) протягом 15 хв. Остудити середу в похилому положенні для формування фаски і стовпчика висотою 2,5 див.

Пептичний перевар тваринної тканини, гідролізат казеїну, дріжджової та м'ясної екстракти є джерелом азотистих речовин, сірки, мікроелементів, вітамінів групи В та ін. Хлорид натрію підтримує оптимальне осмотичний тиск. Лактоза, сахароза і глюкоза – ферментируемые субстрати. Тіосульфат натрію у поєднанні з іонами заліза є індикатором на сірководень, феноловий червоний – індикатор рН.

Мікроорганізм, ферментирующий глюкозу, сприяє утворенню багатьох кислот, що змінюють колір середовища з червоного на жовтий. Більша кількість кислот звільняється в стовпчику (при ферментації), порівняно зі скошеною частиною (окислення). Бактерії утворюють також лужні продукти (в ході окисного декарбоксилювання пептона). Принципове значення має співвідношення глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Індикатор феноловий червоний стає жовтим при значеннях рН менше 6,8. При вихідному значенні рН=7,4 потрібна відносно невелика кількість кислот для розвитку жовтого фарбування середовища. Лужні продукти можуть нейтралізувати невелику кількість кислоти, утворене в скошеної частини при ферментації глюкози. Таким чином, лужної (червоний) скіс і кислий (жовтий) стовпчик вказують, що мікроорганізм ферментує глюкозу, але не ферментує лактозу та/або сахарозу. Бактерії, ферментирующие крім глюкози лактозу та/або сахарозу, утворюють велику кількість кислот, яке не може бути нейтралізовано амінами, тому скіс і стовпчик будуть кислими (жовтими). Якщо під час бродіння утворюється газ, його можна визначити по бульбашок і характерним розривів середовища. Деякі види бактерій відновлюють тіосульфат до сірководню, який, взаємодіючи з іонами заліза, утворює нерозчинний чорний преципітат сульфіду заліза. Відновлення тіосульфату відбувається тільки в кислому середовищі і почорніння зазвичай буває в зоні стовпчика.

Цей агар рекомендують використовувати в поєднанні з Уреазним агаром, щоб провести диференціацію сальмонел і протеев. У сумарному вигляді реакції на середовищі представлені нижче.

Лужний скіс/кислий стовпчик = ферментується тільки глюкоза;

Кислий скіс/кислий стовпчик = крім глюкози, ферментується лактоза та/або сахароза;

Є бульбашки і розриви в середовищі = освіту газу;

Відзначається чорний преципітат = утворення сірководню.

Деякі ентеробактерії та сероводородпродуцирующие сальмонели на цьому середовищі можуть не давати реакцію на сірководень. Деякі бактерії позитивно реагують на сірководень на середовище Клиглера і негативно – на Трехсахарном железосодержащем агарі. Це пов'язано з придушенням ферментативного шляхи утворення сірководню в ході утилізації сахарози.

Зовнішній вигляд порошку: Гомогенний сипучий світло-рожевий порошок.

Щільність готової середовища: Утворюється середовище, відповідна по щільності 1,2%-ному агаровому гелю.

Колір і прозорість готової середовища: Готова середовище має червоний колір, прозора або злегка опалесцирует, якщо в пробірках формується скошений гель.

Кислотність середовища: При 25°С водний розчин (6,5% вага/об) має рН 7,4 ± 0,2.