Агар уреазний (за Крістенсену) М112

Це середовище з додаванням сечовини рекомендують для визначення продукції уреази, зокрема у протеев. Вона рекомендована міжнародним комітетом (ISO 6579: 1993).

 

Визначення уреазної активності на агарі Urea Agar (M112) з сечовиною (FD048), зліва направо: 1. Escherichia coli 2. Klebsiella pneumoniae 3. Proteus vulgaris 4. Контроль (незасеянная середа)

 

 

 

Склад**:

Інгредієнти	М112 грам/літр	М112І грам/літр
Пептичний перевар тваринної тканини	1,00	1,00
Глюкоза	1,00	1,00
Натрію хлорид	5,00	5,00
Натрію гідрофосфат	1,20	–
Калію дигідрофосфат	0,80	2,00
Феноловий червоний	0,012	0,012
Агар-агар	15,00	15,00
Кінцеве значення ph (при 25°С) 6,8 ± 0,2

** Склад вивірений і доведений до відповідності необхідним параметрам

Приготування:

Розмішати 24,0 г порошку в 950 мл дистильованої води. Прокип'ятити для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 0,7 атм (115°С) протягом 20 хв. Охолодити до 50°С і асептично додати 50 мл 40%-ного стерильного розчину сечовини (FD048). Ретельно перемішати, розлити в стерильні пробірки і остудити їх в похилому положенні для отримання скосу. Оскільки сечовина легко руйнується, не допускати перегрівання і повторного нагріву середовища.

Принцип і оцінка результату:

Ця середовище готується у відповідності з прописом Крістенсена (1, 2). Для більш швидкого виявлення уреази фахівці міжнародного комітету (ISO) рекомендували використовувати один фосфат замість двох. Спочатку середовище для виявлення уреазної активності запропонували Rustigian і Stuart (4), але на ній відрізнялися по зростанню протеї, які швидко виявляють уреазную активність, та інші уреазоположительные (цитробактеры, энтеробактеры, клебсієли і не відносяться до ентеробактерій мікроорганізми). Кристенсен отметил, что внесение в среду пептического перевара животной ткани, глюкозы и сниженного количества буфера способствует получению быстрого обильного роста микроорганизмов.

На поверхность косячков обильно засевают испытуемые культуры. При расщеплении мочевины образуется аммиак, который защелачивает среду, что сопровождается изменением цвета индикатора фенолового красного на розово-красный. Поскольку при длительном инкубировании может произойти защелачивание среды за счет образующихся из пептона аминов, для контроля рекомендуется засевать среду без мочевины.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок светло-розового цвета.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет желтовато-оранжевую окраску, прозрачна, если в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,4% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост на среде без крови	Уреаза
Enterobacter aerogenes (13048)	Обильный	–
Escherichia coli (25922)	Обильный	–
Proteus vulgaris (13315)	Рясний	+
Salmonella typhimurium (14028)	Рясний	–

Примітка:
"+" ― позитивна реакція, рожево-червоний колір;
"–" ― негативна реакція, колір не змінений.